本菌源自环境,在水源、土壤等
自然环境中广为分布,人工培养极其困难,致使该菌迟至1977年才被发现。军团菌在BCYE培养基(以酵母浸出液作为蛋白质来源,再加入活性炭;焦磷酸铁的培养基,再加入缓冲剂N-2乙酰胺基-2胺基乙烷磺酸即为BCYE培养基
[6])上培养3~4d可形成灰色菌落。本菌喜水,在蒸馏水中可存活2~4周,在自来水中可存活1年左右。
2.3 军团菌的抗原构造
分析证明其O抗原具有型特异性,藉此可将其分为41种菌型,63个血清型(SG)。军团菌病约90%的是由嗜肺军团菌所致,已发现15个血清型,其中以Lp1血清型最常见, Lp6次之
[7,8]。我国已定型者有Lp1、Lp3、Lp5、Lp6、Lp9等。最近,基因水平
研究表明,某些军团菌含有的巨噬细胞感染增强基因(mip)可调控24~27kD外膜蛋白的形成,这种蛋白可以使正常身强体壮的人患病。这使过去认为军团菌为条件致病菌的
理论受到了极大冲击,这亦使这种可介气溶胶传播的呼吸道传染病变得日益恐怖;同时也可利用mip基因开发相关的PCR诊断技术。
3 军团菌病发病机制
本菌常从呼吸道侵入人体,也可从创面进入人体,人-人之间传播尚无充分证据。污染有此菌的气浴胶被人吸入后,可直接穿入呼吸性细支气管和肺泡,与吞噬细胞、中性粒细胞附着,并进入细胞进行繁衍,直到细胞破裂,产生一些淋巴与细胞毒性因子,引起肺损害。另外,军团菌还可直接产生释放各种毒素和酶,引起肺的持续性损害。如外毒素可溶解细胞
[9];内毒素如脂多糖(LPS)能阻止吞噬体与溶酶体的融合;毒素类物质可损害单核-巨噬细胞的杀菌功能;磷脂酶可
影响细胞内第二信使的形成, 从而抑制吞噬细胞的活化
[10]。蛋白激酶能
影响吞噬细胞的活化和杀菌功能
[10];蛋白酶能灭活白细胞介素-2和裂解人T细胞表面CD4,从而干扰T细胞活化和功能的发挥。
由嗜肺军团菌引起肺炎,以肺部感染为主,可合并肺外多系统受损的一种急性细菌性疾病;肺外感染多因肺炎过程中菌血症播散所致,多表现在胃肠道、肾脏、神经系统,少数病例可发生肝脏损害、心包炎、局灶性心肌炎、肛周脓肿、皮肤粘膜改变等[11] ;也可表现为无肺炎的急性自限性的流感样疾病——庞蒂亚克热(Pontiac fever)。
4 军团菌病的诊断
4.1 诊断标准[12](试行):①临床表现:发热、寒战、咳嗽、胸痛等呼吸道感染症状;②X线胸片具有炎性阴影;③呼吸道分泌物、痰、血或胸水在活性炭酵母浸液琼脂培养基(BCYE)或其它特殊培养基培养有军团菌生长;④呼吸道分泌物直接荧光法(DFA)检查阳性;⑤血间接荧光法(IFA):查前后2次抗体滴度呈4倍或以上增高,达1∶128或以上;血试管凝集试验(TAT):测前后2次抗体滴度呈4倍或以上增高,达1∶160或以上;微量凝集试验(MAA):测前后2次抗体滴度呈4倍或以上增高,达1∶64或以上。凡具有1、2项,同时以具有3、4、5项中任何一项者,诊断为军团菌肺炎。
4.2实验室诊断:
4.2.1 染色法:气道分泌物革兰染色上,发现炎症细胞而无病因意义的病原体时,当怀疑可能为军团菌感染。作Himenes染色,如炎症细胞中染出红色杆菌,便可基本认定为本菌。另外,还可作Giemsa染色、镀银染色检查。缺点是其特异性不稳定,且需肺活检,对组织损伤大。另外,某些军团菌也呈抗酸染色阳性[13]。
4.2.2分离培养:病人唾液、痰、胸水、血液、气管抽吸物、尸检或活检组织以及环境因素如水、土壤等均可用于分离细菌。常用的培养基为BCYE,团菌在本培养基上菌落呈大小不一之乳白色,具独特之酸臭味;国内研制的以猪肺、绵羊血、L半胱氨酸和复合维生素B为主原料的培养基效果亦佳。
培养的缺陷性在于:(1)培养结果受标本采集质量、操作技术的影响,阳性率不一。 (2)费时较长,约7~10天。(3)培养基不易制作,技术要求高,价格较贵。(4)细菌的非培养状态,即活菌在培养基上不生长的情况可影响结果的判定。
4.2.3 直接免疫荧光抗体法(DFA):取呼吸道分泌物标本,用荧光素标记的抗军团菌抗体直接与标本作用后观察细菌形态,优点是简便、快速,2h内可出结果,特异性好;缺点是敏感性低,且只能用于Lp的检测。单克隆抗体
应用于DFA与多价血清相比,特异性及敏感性均增高。
4.2.4 核酸探针技术:原位杂交技术能够特异性的检测到细菌,且可完整地保持组织细胞及细菌的形态,将原位杂交和聚焦激光扫描电镜技术结合将非常有助于检测细菌的空间及时间分布情况。[14]